动物造模,基因敲除 中国实验动物信息网 2022-03-16 1715

　　目的： 探讨小凹蛋白-1(caveolin-1)基因敲除小鼠的鉴定方法与*优繁育方式,为深入研究caveolin-1在脑缺血损伤修复中的作用提供理想的动物模型。

　　方法：将引进的caveolin-1基因敲除小鼠饲养于SPF级实验室,煮沸裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,根据美国杰克逊实验室(Jackson Laboratory)提供的引物序列进行PCR反应检测其基因型,采用caveolin-1+/-杂合子互交、杂合子与caveolin-1-/-纯合子杂交(正交及反交)、纯合子互交4种不同的交配方式,观察亲代小鼠的受孕率、子代小鼠的外形特征及纯合率。

　　结果：琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物分子量大小约200 bp和661 bp,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了caveolin-1基因敲除小鼠的不同基因型;不同交配方式的繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌性、雄性caveolin-1-/-纯合鼠具有一定的繁殖能力,三种不同基因型小鼠的外形特征无明显差异。

　　结论：煮沸裂解法提取基因组DNA、PCR法能够快速可靠鉴定caveolin-1基因敲除小鼠的基因型;caveolin-1杂合子小鼠互交与纯合子互交相结合的繁育方法可能是短期内获得足量纯合子子鼠与同源野生子鼠的较好方式。