视网膜感光细胞,动物造模 中国实验动物信息网 2020-07-24 1499

　　据报道，猪视网膜中含有大量的线粒体。由于很少有关于哺乳动物感光体中大线粒体的报道，因此使用扫描电子显微镜（SEM）评估猪，兔子和小鼠视网膜的形态。为了获得宽视野的高分辨率图像，我们采用了独特的扫描电子显微镜方法。使用传统的SEM，不需要嵌入和切片步骤，仅可见标本的表面。相比之下，我们的SEM技术涉及在载玻片上安装单个或连续的超薄切片，用重金属染色并扫描反向散射电子。通过数字化“组合”连续的SEM图像，可以以高分辨率获取宽视野的图像。图1a显示了猪视网膜的电子显微镜图像。图1b是猪感光细胞层的电子显微镜图像。图1c是图1a中的视锥的放大图，图1d是图1a中的视杆的放大图，图2a是兔视网膜的电子显微镜图像。图2b是兔感光体层的电子显微镜图像。图2c示出了图2a的平截头体的放大图。图2d示出了图2a的杆部分的放大图。图3a示出了小鼠视网膜的电子显微镜图像。图3b显示了小鼠感光层的电子显微镜图像。图3c示出了图3a的观察锥的放大图。图3d示出了图3a的杆部分的放大图。 OS：外部，IS：内部，ONL：外部核层，OPL：外部丛状层，INL：内部丛状层，IPL：内部丛状层，GCL：神经节细胞层。 CIS：锥形光接收器。IS：杆传感器部分。

　　实验设计，材料，方法

　　视网膜在实现视觉方面起着重要作用，因为它参与接收光刺激并将信号发送到视觉皮层。脊椎动物视网膜由数个细胞层组成，包括神经节细胞，双极细胞，无长突细胞，水平细胞和感光细胞。另外，感光体表现出功能特异性。杆状光感受器介导暗视，视锥细胞介导明视。光吸收并将其转换为电信号（光电转换）以及将信号从感光器传递到视网膜神经元需要大量能量。为了满足这种高能量需求，许多线粒体分布在感光体的内部区域内。在某些物种中，例如虎头鱼和斑马鱼，视锥细胞感光器的内部部分包含直径大于2μm的异质线粒体，称为巨型线粒体。通常认为，锥体感光体比棒状感光体消耗更多的能量，并且巨大的线粒体负责这些细胞的高能量产生。但是，这些特征性线粒体的生理意义尚未完全了解。在我们先前的研究中，猪视网膜还包含与在斑马鱼中观察到的线粒体相似的大线粒体，仅聚集在锥体感光细胞内并且彼此聚集。 ..需要进一步研究其他哺乳动物物种，以阐明光感受器中巨大线粒体的存在的生物学意义。我们观察了猪，兔子和小鼠的视网膜。原始的SEM方法用于获得具有宽视场的高分辨率图像。在该实验中，电子显微镜用于检查兔和小鼠视网膜感光细胞内部部分中巨大线粒体的存在。我们还比较了猪，兔和小鼠视网膜中感光细胞内部部分的线粒体形态。

图1.猪视网膜的超微结构。

图2.兔子视网膜的超微结构。

图3.小鼠视网膜的超微结构。

　　动物：来自屠宰场的猪眼。将八周大的新西兰兔用异氟烷安乐死，并移开眼球以使视网膜脱离。将八周大的C57BL/6小鼠用异氟烷安乐死，灌注固定剂，取下眼球，并取下视网膜。

　　使用扫描电子显微镜观察视网膜的形态。使用常规的扫描电子显微镜，不需要嵌入和切片步骤，仅观察到表面。本实验中使用的SEM技术包括将单个或连续的超薄切片安装在载玻片上，用重金属对其进行染色，并扫描反向散射的电子。通过数字化“组合”连续的SEM图像，可以以高分辨率获取宽视野的图像。在4°C下除去角膜，晶状体和虹膜的前部结构，并用固定剂（2.5％戊二醛，2％多聚甲醛溶液，0.1M磷酸钠缓冲液，pH 7.4）除去。我会过夜。用0.1 M磷酸盐缓冲液冲洗眼睛两次，每次10分钟，然后切碎视网膜。将修剪过的视网膜在1％四氧化os中固定2小时，然后在各种浓度的乙醇（50％，70％，80％，90％，100％）中脱水15分钟。脱水后，样品用QY-1漂洗两次（每次15分钟），用QY-1和Epon812的混合物（1：1比例）漂洗一次并包埋在Epon812中。用超薄切片机切成超薄切片（100m），并用1％乙酸铀酰和柠檬酸铅染色。然后用扫描电子显微镜观察样品。通过使用反向散射电子以1.5 kV的加速电压对超薄横截面