动物造模,胃溃疡模型 中国实验动物信息网 2022-01-13 1429

　　消化性溃疡是指由于胃消化液本身的消化而引起的超出肌层粘膜的组织对胃肠道粘膜的损害。消化性溃疡可发生在胃肠道的任何部位。其中，胃和十二指肠较常见。所谓的胃溃疡和十二指肠溃疡在病因，临床症状和治疗上基本相似，主要通过胃镜检查可以明确诊断。胃溃疡是消化性溃疡*常见的疾病，胃溃疡的发展主要与胃十二指肠粘膜损伤因子和粘膜自卫与修复因子之间的不平衡有关。幽门螺杆菌感染，非甾体抗炎药（阿司匹林）和胃酸分泌异常是溃疡的常见原因。胃溃疡主要发生在胃的角和鼻窦的小弯曲处。胃酸和胃蛋白酶是胃液中非常重要的消化液。胃酸是具有强腐蚀性的强酸性物质。胃蛋白酶具有水解蛋白质的能力，并且可以破坏胃壁中的蛋白质。然而，即使存在这些侵蚀性因素，胃肠道也可以抵抗并维持粘膜的完整性及其自身功能。主要原因是胃和十二指肠的粘膜也具有一系列防御和修复机制。在正常情况下，胃和十二指肠粘膜的保护机制足以抵抗胃酸和胃蛋白酶的侵蚀。但是，当某些因素破坏保护机制中的某些环节时，胃酸和蛋白酶会侵蚀粘膜并形成溃疡。如果胃酸分泌过多，远远超过粘膜的保护和修复作用，则会引起溃疡。*近的研究表明，幽门螺杆菌和非甾体类抗炎药是溃疡的*常见原因之一、溃疡会损害胃肠道的保护机制。胃酸在溃疡的形成中起着非常重要的作用。此外，药物，压力和激素也会引起溃疡。典型的活动性胃溃疡通常分为四层：*层是由坏死细胞，组织碎片和纤维蛋白样物质组成的急性炎性渗出液；第二层是主要有利的中间层第三层是肉芽组织包含增生的毛细血管，炎性细胞和结缔组织的各种成分的层。第四层是纤维或疤痕组织层，其延伸到肌肉层，甚至可以到达坏死层。通常不会观察到典型的四层溃疡结构，因为内窥镜活检只能到达粘膜层或粘膜下层。组织病理学主要表现为粘膜层中炎性细胞的浸润。有淋巴细胞和中性粒细胞。基于细胞的内在炎症或肉芽肿的形成。胃溃疡的症状通常不典型，可能表现为腹痛或不适。它们大多数具有消化不良的各种症状，但有些症状在并发症发生之前是无症状的。常见并发症包括出血，穿孔和堆积器阻塞。随着癌症等人类社会的发展，竞争日益激烈，由于各种高压因素的影响，患胃溃疡的人的比例也在增加。在解决和治疗胃溃疡疾病之前向我们挑战。越来越多的人希望研究人类消化系统疾病的动物模型，以确定其病因并提高疾病的治愈率。由于小型猪的养分吸收和胃肠道结构与人类相似，因此用小型猪制成的胃溃疡模型相对于其他物种的动物模型具有独特的优势。猪胃溃疡模型可分为两大类：自发性和诱发性。

　　1、自发性胃溃疡模型自发性胃溃疡主要是由于异常过量的胃酸和胃蛋白酶分泌到胃中，引起胃粘膜破坏引起的溃疡现象。猪的自发性胃溃疡通常是由感染性肠胃炎和经典的猪瘟病毒病引起的。随着大规模养猪业的发展，猪胃溃疡的病例数迅速增加，并且还提供了许多适合研究猪胃溃疡的模型动物。由于猪是单胃杂食动物，因此多发性胃溃疡与人相似，并且作为人胃溃疡疾病模型处于良好状态，为人胃溃疡疾病研究提供了极好的模型。小型仔猪自断奶到成年可出现自发性胃溃疡模型，其发作后的临床症状和病理特征与人类相似。易发部位是胃食管，其症状类似于许多人的胃溃疡的临床症状。猪和人都是具有一个胃的杂食性动物，胃黏膜的结构，饮食习惯和生理特征与人非常相似，使其成为人胃溃疡的良好动物模型。猪食道下括约肌受神经和体液因素调节。人反流性食管炎（食道溃疡）受胃肠激素，尤其是胃泌素的影响。当猪患上胃食管溃疡时，肉提取物负荷试验表明胃泌素的分泌减少。从这一点上也可以看出这一点。这类似于临床症状。人胃溃疡。胃损伤主要发生在card门周围的食道周围，它不分泌胃酸，很少在胃酸分泌的地方发生。病变的上皮变化通常是角化过度，弥漫性溃疡，穿孔的溃疡或溃疡，在愈合后仍留下疤痕，并沿食道粘膜纵向分布，形成放射状的粗大褶皱并扩散，不仅固有层乳头状乳头受损和血渗出。焦平面向外融合，但不仅会融化并扩张，而且会深入粘膜肌层，*终形成溃疡。溃疡为椭圆形，新月形或新月形，某些仅在食道周围发生或遍布整个食道。当溃疡变得慢性时，在溃疡的坏死过程中部分胃组织塌陷，并且溃疡的活动部分开始纤维化。胃壁坏死水平发展并同时通过。它垂直穿过肌肉层并直接发展到浆膜下膜，导致腹膜炎。胃底的大多数溃疡局限于粘膜脊或粘膜褶皱之间的平坦区域。病变的宽度为约0.2-0.5cm，长度为约4-7cm。组织学观察，急性胃溃疡，card门周围胃食管的上皮细胞肿胀，增大，不规则，并且上皮角化程度不一致。固有层由于炎症和出血而肿胀。乳头塌陷或凸起很深，到达固有层。固有层具有炎性细胞的浸润。溃疡性坏死组织边缘充血，肿胀或出血。病原微生物侵蚀着被纤维坏死膜覆盖的溃疡的基部和表面。亚急性胃溃疡与结缔组织增生性硬化症有关，在该结缔组织中，活细胞在衬有基底层的坏死组织下缓慢增殖。慢性胃溃疡是一种呼吸急促的口状病变，其根部较硬。肉芽组织在坏死的基底表面下形成，并包含炎性细胞。肉芽组织被固定在ab上，结缔组织在溃疡边缘收缩。

　　2、诱发胃溃疡模型

　　（1）冰醋酸诱发的胃溃疡模型：近年来，研究人员发现强制饲喂冰醋酸可以成功地复制小型猪的胃溃疡模型。 3小时后，用360ml/L的冰醋酸表明，用肉眼观察到的胃内壁凸起是明显的白黄色严重缺血性坏死，并且在显微镜下严重损伤了胃溃疡组织的固有层。这表明粘膜上皮层在某些区域已完全消失，固有层固有层暴露在外。这种方法可能更好。小型猪胃溃疡模型的复制。它为进一步分析其病理变化提供了一个极好的研究平台，并揭示了人胃溃疡病的病因。 ..

　　示例：

　　中国有4头农场大小的猪，重8.5-11.5公斤，雄性。腹腔注射2％戊巴比妥钠（1.5-2 ml/kg相当于30-40 mg/kg）进行麻醉。首先，测量从下唇到小型猪剑突的食道长度，并从口中插入一个12 Fr胃导管，直到食道长度超过2-3 cm。在麻醉下，胃管穿过食道，不能被动物吞咽。操作者需要缓慢移动，以防止由于协作阻力而损坏食道。要查看插入后是否将其插入胃中，请将胃管的另一端插入水中，并观察水中是否有气泡，以消除被插入肺部的可能性。然后，使用20毫升注射器，注入15毫升95％的乙醇，无水乙醇或36％的冰醋酸（实际上10毫升进入胃，5毫升进入胃管）以损害局部溃疡。实验被分成三组：一头小猪，其灌注有95％的乙醇，一头小猪，具有无水乙醇，和两只小猪，其灌注有36％的冰醋酸。注射后3小时收集材料。对动物实施安乐死后，通过剖腹术将胃切除，沿胃的曲率打开胃的内壁，并形成明显不同于周围正常胃组织（白色粉末）的片状溃疡表面。取胃组织和正常胃组织中的红色炎症变化，固定在无水乙醇中，包埋在石蜡，冷冻切片中，用HE染色，在常规光学显微镜下观察并拍照。根据实验结果，即使口服95％乙醇，幽门附近的胃粘膜也完整无损，粘膜呈淡红色，表面光滑，局部略有充血，浮肿，和深红色。显微镜检查显示胃粘膜和胃凹的上皮完好无损，但一些上皮肿胀并轻微受损。用无水乙醇进行胃内给药后，幽门附近的胃粘膜皱褶仍然完好无损，但与95％乙醇胃内给药模型相比，粘膜深红色的深度和面积显着增加。显微镜检查发现胃粘膜上皮受损并明显变薄，但残留少量上皮组织，胃凹窝缩短，溃疡表面明显受损。胃内给予36％冰醋酸后，胃壁升高，明显呈白色和黄色，表明严重的无血管坏死。显微镜检查显示组织的粘膜上皮层严重受损，某些区域的粘膜上皮层完全消失，固有层暴露。胃内给药后一天，溃疡变得更加明显，并且溃疡表面的边界清晰可见。 （2）抗炎药诱发的胃溃疡模型：非甾体抗炎药，例如阿司匹林和消炎痛，以及其他具有抗炎，解热和镇痛特性的药物，通常被认为能够破坏糖尿病。胃粘膜屏障。它改变细胞膜的通透性，影响粘膜血流和细胞再生，并抑制前列腺素和其他引起胃功能损害的机制。对小猪口服大剂量的阿司匹林会导致猪胃粘膜表面出血，从而导致严重的胃粘膜细胞脱落。长时间向胃内给药时，会发生诸如胃溃疡之类的变化。 （3）幽门螺杆菌诱发的胃溃疡模型：幽门螺杆菌（Hp）首先从患有慢性胃炎的患者的胃粘膜层和上皮细胞中分离出来。在1990年，确定了Hp与慢性胃炎和消化性溃疡之间的关系。*近的研究表明，Hp也与胃溃疡和胃癌的发展密切相关。幽门螺杆菌感染是慢性胃炎和消化性溃疡发展的重要因素。幽门螺杆菌产生的脲酶，磷脂酶，脂肪酶和糖基硫酸酯酶均具有破坏胃和十二指肠粘膜粘膜的作用。屏障功能。建模技术通常分两个阶段执行。*阶段是幽门螺杆菌感染实验。用于建立被Hp感染的动物模型的菌株是Hp国际标准菌株sydneystrain1（ss1）。 SS1包含细胞毒性基因和液泡毒素基因。可以使用固体或液体介质，50 mg/L除颤的羊血和万古霉素10 mg/L，多粘菌素B2500 U/L，抗菌增效剂5 mg/L，需氧量微环境（体积分数5％O2、8）添加％CO2 80％N2））在37°C下孵育72小时。通常通过口服给动物接种，每次感染前禁食12-14小时，向胃管中注入1.5 ml细菌溶液，30分钟后进食，每周感染一次，共感染6次。感染动物的鉴定：收集胃粘膜组织，准备病理切片和粘膜涂片，并分离和培养。在革兰氏染色显微镜下，用三种酶（脲酶，过氧化氢酶和氧化酶）测试分离出的Hp，确定其是否为SS1、第二步是通过在诊断猪为幽门螺杆菌阳性后继续感染幽门螺杆菌，并通过胃镜检查确认是否形成胃溃疡，从而在小型猪中建立胃溃疡的动物模型。

　　3、急性消化性溃疡模型该模型通常使用幽门结扎建立急性消化性溃疡模型。 Shay等人的幽门结扎术。建立（1945）建立的胃溃疡模型是一种简单有效的方法。其作用机理主要是由于酸性胃液在胃中的积累，导致胃粘膜受损。猪胃溃疡模型。用于寻找抗溃疡药物和研究溃疡的机理。