动物造模,肝纤维化模型 中国实验动物信息网 2021-12-09 3365

　　（1）复制方法成年大鼠，麻醉后打开腹腔，在十二指肠降膜肠系膜中发现并释放胆总管，在其下方穿过两根丝线，并向肝切一个“ V”形切口。使用1 ml将组织粘合剂（TH粘合剂）或0.3 ml/kg体重的N-丁基-2-氰基丙烯酸N丁酯注入注射器的近端，进行两次结扎并切开胆总管。手术后定期将其保存8周。在此期间，观察动物的一般活动和身体体征，并动态地从眼眶取血至丙氨酸氨基转移酶（ALT），天冬氨酸氨基转移酶（AST），总胆红素（TBIL），并准备结合物的血清。胆红素（DBIL）。 ），碱性磷酸酶（ALP），γ-谷氨酰转肽酶（GGT），透明质酸（HA）和层粘连蛋白（LN）含量检测，完成模型，收获肝脏以制备羟脯氨酸匀浆（Hyp）含量并取样根据光学显微镜和电子显微镜的要求对肝组织进行形态学检查。

　　（2）模型的特征手术后一周，模型动物出现了黄疸。血清ALT，AST，TBIL，DBIL，ALP和GGT的水平在第2、4和8周增加，并且它们的含量随着血清HA和LN的增加，肝组织Hyp胆道闭锁时间的增加而逐渐增加。光学显微镜下观察发现，造模后1?3周肝小叶结构被破坏，肝细胞大小不同，有的呈气球状，门静脉区和胆管有明显的炎性细胞浸润。我会的扩张，胆汁淤积，增殖和胆道上皮细胞增生，出现大量成纤维细胞，延伸到小叶并形成纤维索。大多数小叶门区具有大量的I型和III型胶原蛋白生长。在8周内，增生性胆管占据了肝小叶的大部分，剩余的小肝细胞增生的胆管被分成岛状，大量胶原蛋白沿着增生的胆管沉积，并且纤维间隔更细。电镜观察发现，模型组大多数肝细胞具有不规则的核，皱纹或破裂的核膜，一些核仁消失，细胞质中的细胞器明显减少和变化，可见细胞器破裂产物，其中一些显示出粗糙，细胞器显示出囊性肿胀，大量的核糖体丢失，一些线粒体肿胀消失。细胞膜破裂不完全；脱落的肝细胞窦表面绒毛，细胞之间的连接松动，间隙扩大；胆管细胞增生，腔扩大和管腔微绒毛变形，水肿或缺失；胆汁周围可见大量胶原蛋白纤维导管和模腔中出现，露出鼻窦周围的毛细血管。

　　（3）比较医学肝外胆管阻塞会导致胆管上方的梗阻部位扩张，胆汁淤积，胆管压力升高，并可能引起肝内胆管扩张和破裂。当肝内血管被扩张的胆管和胆汁外渗压迫时，肝细胞经历局部缺血和坏死。纤维组织向胆管延伸，围绕肝小叶，在肝细胞周围扩散，并引起纤维化增生，甚至胆管发育。肝纤维。通过逆行注射组织粘合剂（TH粘合剂）和胆总管结扎诱发的肝纤维化动物模型具有胆汁性肝纤维化的独特特征。模型的主要特征：模型动物的炎症程度较小，肝纤维化的形成较快，自发逆转率较低。具体而言，建模操作后的肝细胞坏死尚不清楚。反映肝细胞损伤程度的血清ALT水平在手术后的*天仅迅速而迅速地增加，但随后又迅速下降。造模后一到两周，肝组织入口区域附近的胆管增生，周围有纤维组织沉积物；两周后，胆管周围的增生性纤维组织围绕肝小叶，开始分离，这也反映出肝纤维化程度。血清和组织中LN和HA的含量可以增加或维持在较高水平，肝组织中Hpy的含量可以在4周内上升到正常水平的三倍。在建模的4-8周内，与增生性胆管相比，大量胶原蛋白沉积在弥漫性增生性胆管周围，肝细胞明显减少。反映胆汁淤积的指标TBIL，DBIL，ALP和GGT仍然很高。血清组织的LN和HA指标仍然很高。 16周后，肝组织仍显示出明显的纤维化，纤维间隔增厚。与单纯胆管结扎或胆管结扎并切除所致的肝纤维化动物模型相比，后两种模型动物更易发生胆管再通，因此导致胆道闭锁的时间更长，这很困难。肝纤维化的特征可以在短时间内减弱或消失。该模型可以长期维持模型动物的肝纤维化状态的原因是在建模操作期间将TH粘合剂或N--2-氰基丙烯酸N-丁酯注入胆管是一项重要的技术。该方法从技术上保证了胆管特别是肝内胆管的完全闭塞。考虑到该模型的简单建模方法，较短的建模周期，较长的维护时间，明显的病理特征以及动态使用无创血清学指标，许多学者对肝纤维分析进行了选择。该模型更适合于研究肝纤维化的形成机理和评估药物治疗纤维化的功效。