动物造模,尿道疾病动物模型 中国实验动物信息网 2021-10-13 1737

　　氟他胺诱导的1只小鼠尿道下裂模型（1）复制方法将10周龄的纯净水平的昆美小鼠关在笼子里过夜，将阴道栓塞后的雌性小鼠在第二天早晨饲养在一个笼子里。在怀孕的*天，在怀孕的第15天将氟他胺（flutamide）口服给小鼠，并在给药前将氟他胺片剂粉碎成细粉。将该药物溶于0.4ml蒸馏水中，并连续给药5天。剂量为133.3mg/kg体重，200.0mg/kg体重，266.7mg/kg体重和333.3mg/kg体重。在后代出生后第21天收集雄性小鼠，并用肉眼和解剖显微镜观察各剂量组中雄性小鼠的外生殖器的形态变化，并根据以下四项进行判断。等级：等级0：没有变形，外生殖器突出的大小和形状基本正常，没有明显的裂缝。 1级：轻微变形，生殖器突起的上部明显裂缝，外观为“ M”。 2级：中度劳损，生殖器突出明显较小。裂缝，阴囊毛发，睾丸不突出，隐睾，女性外表；等级3：严重异常，生殖器突起完全撕裂，尿道向肛门开放，隐睾具有假阴道凹陷结构形式。

　　（2）模型特征当观察模型动物的外生殖器时，体重为133.3 mg/kg的雄性小鼠的外生殖器没有明显的异常，而200.0 mg/kg的外生殖器没有明显的异常。千克雄性小鼠，无明显异常。公斤重组突出，上部明显裂纹，变形率可达86.6％，主要为轻度异常。另一方面，体重为266.7 mg/kg的雄性小鼠的生殖器官与雌性小鼠非常相似。阴囊上的头发，没有凸出的睾丸。隐隐变形，变形率达到83.3％； 333.3 mg/kg体重组的雄性小鼠具有完全分裂的外生殖器突起，在肛门侧形成阴道样结构。 ，所有这些都显示出明显的中度到重度变形。根据观察和统计分析，从受孕后第15天开始对模型小鼠口服氟他胺，剂量为200.0至333.3 mg/kg体重，连续给药5天可引起80％以上的雄性。 。出现小鼠先天性呼吸不足。该模型创建方法简单方便，模型创建时间短，成本低，模型形成率高。 （3）比较医学Hypospadias是临床上常见的先天性髋关节发育不良之一、并且其发病率近年来一直在增加。建立理想的先天性尿道下裂动物模型可以为该病的病因学和药物治疗研究提供有价值的实验材料。导致疾病发展的因素包括环境因素，内分泌因素和遗传因素。创建该模型的方法基于雄激素受体干扰的原理，氟他胺可用于干扰体内雄激素的正常作用，并成功复制先天性雄激素破裂的小鼠模型。在此期间，雄性小鼠的雄激素和尿道在胚胎期的第17天开始发育，并在第19天完成，因此小鼠体内存在睾丸激素及其生物转化剂二氢睾丸激素（DHT）。雄激素。在男性生殖分化中非常重要的作用。但是，这种作用必须由体内的雄激素受体（AR）介导，并且靶细胞的AR功能是正常的，以确保雄激素功效的正常表达。因此，雄性动物（人类）生殖器官的分化和发育与AR密切相关。在建模过程中使用的氟他胺是雄激素受体拮抗剂。过量的氟他胺可能在雄性胎鼠的外生殖器和尿道发育阶段干扰雄激素的作用，从而可能干扰雄激素的作用并导致雄性幼犬。尿道下裂发生率低。该模型可用于上尿道下裂的病因学和药物治疗的临床研究。 2用己烯雌酚建立尿道下裂的大鼠模型（1）复制方法将体重200至250 g的成年大鼠放在笼中过夜并进行交配。到第二天早晨，在阴道繁殖后在一个笼子中观察到雌性大鼠。这被认为是怀孕的*天。将己烯雌酚（DES）片剂磨成粉末，制成1.5 ml含盐的DES悬浮液，并在试管饲喂期间充分摇匀。从妊娠的第12天到第17天，每天以100μg/ kg体重的剂量口服1.5 ml DES，共6次。怀孕的老鼠怀孕到21日。自发出生后，对新生大鼠计数并在放大镜下观察包皮外观，尿道口位置，排尿，体重和肛门生殖距离的测量值。然后用解剖显微镜（AGD）确定尿道下裂是否存在畸形并拍照。 （2）模型特征DES注射可引起雄性后代尿道下裂，模型发生率约为30％。正常新生男性后代的尿道在阴茎上部打开，包皮完整。当被刺激时，排尿变成线性的。尿道下裂畸形的新生雄性后代的尿道在阴茎和会阴的交界处或在阴茎腹侧打开，包皮撕裂在阴茎腹侧，露出龟头。另外，一些尿道下裂后代的尿道在海绵体腹侧或阴茎根部开放。它类似于人的阴茎尿道下裂或会阴尿道下裂。模型雄性幼犬的AGD比正常幼犬的AGD短，这表明DES对雄性个体具有女性化作用。同时，在DES作用下，雄性幼犬的体重明显低于正常幼犬。妊娠中期和后期是子宫内体重迅速增加的时期。

　　（3）比较医学Hypospadias是临床儿科手术中*常见的先天性畸形之一、其发病率正在上升，但其原因和机制目前尚不清楚。因此，建立与临床小儿先天性尿道下裂相似的动物模型具有非常重要的临床研究价值。该模型使用自发畸形发生率低的大鼠。通过在怀孕期间对怀孕的大鼠施用DES，可以成功地制备新生的雄性尿道下裂大鼠。该模型方法简单，时间短，成本低，易于观察。与小鼠相比，大鼠自发致畸的发生率很低，自发受孕率高于小鼠，耐药性很强，同时大鼠后代的大小也较大。鼠标变形很容易观察到。该模型比小鼠尿道下裂模型更易于观察和操作，并且是研究尿道下裂的病因，预防和治疗的极好的动物模型。 3邻苯二甲酸二丁酯引起的呼吸不足大鼠模型（1）复制方法将重约220g的成年雌性大鼠与雄性大鼠交配过夜，并在第二天清晨观察它们的存在。看到阴道塞的那一天是怀孕的*天，将雌性老鼠定期放在一个笼子里，随意喝酒和进食。将邻苯二甲酸二丁酯（DBP）以500 mg/kg的体重添加到精制大豆油中，并从妊娠的第12天到第19天每天口服一次。管饲剂量仅为1 ml /天。在妊娠期结束时自然怀孕。出生后70天（大鼠性成熟），一一检查并测量雄性小鼠的阴茎长度，弯曲度和尿道口。使用带有千分尺的显微镜来确定肛门和生殖器之间的距离（AGD）以及是否存在脊柱下凸。在第19天，一些怀孕的小鼠进行了剖腹产，并从雄性小鼠中收集了睾丸组织。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）用于检测睾丸激素合成过程中决定速率的酶细胞色素P450胆固醇。 mRNA水平链裂合酶（P450SCC），3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）和细胞色素P45017（α-羟化酶（P450c17）。正常雄性后代的标准：正常雄性大鼠尿道位于睾丸上方打开时，前皮刺激时完整和排尿可以是线性的；在男性中，尿道下裂大鼠的尿路是阴茎和睾丸的交界处或阴茎体的腹侧，前侧皮肤的眼泪和颗粒是裸露的，这表明一定剂量的DBP会导致大鼠呼吸不足此时的妊娠大鼠妊娠12-19日子宫内雄性大鼠后代的泌尿生殖系统已经形成并开始发育，这时强迫饲喂DBP（500 mg/kg体重） DBP诱发的呼吸不足组的胎儿大鼠睾丸组织中P450SCC，3β-HSD和P450c17的基因表达水平低于正常胎儿，结论DBP干扰后代雄性，性发育小鼠睾丸组织中睾丸激素的生物合成途径降低了睾丸激素水平，导致大鼠出生后出现呼吸不足。

　　（3）比较医学裂解酶是一种前尿路发育不良的临床原因：使阴茎尿路张开至其正常位置的变形通常与阴茎屈曲有关，并且主要在男性中发现，这是儿童尿路疾病的常见先天畸形，并一直在逐年增加。异常的外表和排尿方式严重影响了儿童的身心发育，这种疾病通常与隐性睾丸疾病，间接疝等其他变异结合在一起，可能导致性生活困难。成年后会给儿童和家庭造成问题，生活会带来严重后果，呼吸不足的原因如此复杂，以至于其病因尚未阐明，环境污染物是增加呼吸不足发生率的因素之一。一种廉价实用的增塑剂，广泛用于人们的日常生活和生产中，也是一种环境污染物，属于抗雄激素类环境内分泌干扰物质，其作用机理与氟他胺相似，但并不完善唔。是一样的。 DBP对动物具有明显的睾丸毒性，胚胎毒性和生殖畸形。这可以显着降低体内的睾丸激素水平，导致睾丸萎缩，睾丸萎缩和附睾发育不良。继发性腺和外生殖器。男性生殖系统的病理损害，例如旷工和呼吸不足。除使用氟他胺外，DES和DBP还可引起动物呼吸不足，苯甲酸和阿司匹林也可引起小鼠呼吸不足。下丘脑模型主要与药物对动物激素水平的影响有关，因为由于临床尿道而导致尿道下裂的患者经常与性激素，特别是体内雄激素的异常代谢有关。下丘脑不仅是身体的局部畸形，而且是内分泌失调的局部症状。药物引起的尿道下裂可能主要是由于宫内节育器腹侧尿道上皮细胞凋亡和增殖活性改变的结果。因此，诱发尿道下裂的位置与药物接触时的胎龄密切相关。 DBP诱发尿道下裂的大鼠模型为先天性尿道下裂的病因和环境污染物与儿童尿道下裂的发生之间的关系提供了科学的动物实验证据，用于临床研究。