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【动物造模】-采用冷冻法复制角膜内皮损伤动物模型

  (1)繁殖方法对于体重2至2.5 kg的实验兔子,在冷冻前连续3天每天两次将0.25%氯霉素眼药水滴入双眼,并在第4天滴入2 ml/kg。体重通过耳静脉。使用1.5%的戊巴比妥钠麻醉和0.4%的benoxil溶液灌注眼表麻醉。将直径为8毫米的铜制低温探针浸入液氮中几秒钟,然后再将其取出。当探针温度达到-120°C时,将其垂直于兔子角膜的中心表面放置,并使其完全接触5-15秒。

  (2)模型特征:模型动物冰冻区的角膜内皮细胞被完全破坏,损伤区与未损伤区之间的边界清晰可见。冷冻5秒钟和15秒钟会在类似区域导致角膜内皮缺损,但是冷冻5秒钟会减少角膜浮肿。损伤后三天,一小部分角膜内皮愈合,损伤后四天,所有角膜内皮缺损均被大小不等,形状不规则的再生内皮细胞覆盖。损伤后十二天,再生的内皮细胞趋于大小均匀且呈多边形。

  (3)比较医学该模型的稳定性和可靠性非常重要,因为建立角膜内皮损伤模型是进一步研究内皮损伤后自发反应和药物作用的基础。复制角膜内皮模型的方法主要包括机械损伤,超声损伤,碱烧伤和总的低温角膜损伤。机械损伤方法通常使用trefin挖掘动物自身的角膜,用棉签擦拭内皮细胞,然后将角膜移植物重新植入自体植入床。该方法难以操作。将放置特殊设备。内皮层的损伤对角膜和其他组织的基底膜的影响相对较小,但是增加了眼内感染的可能性。超声损伤是将晶状体乳化剂通过角膜瓣环切口切入前房,使内皮受到非接触性超声损伤。此方法类似于机械损坏的方法。碱烧伤法是一种内皮损伤的方法,其中将浸泡在1 mol/LaOH溶液中的一定直径的圆形滤纸放在兔子的角膜表面1分钟。这种方法很简单,但是内皮是一个双相愈合过程:烧伤后1周,内皮缺陷完全被直线上迁移的内皮细胞覆盖,但是在这一层中再生的内皮细胞在1周内经历了继发性腐烂,并且容易使实验结果复杂化。整个角膜冷冻方法是将冷金属冷冻探针放置在动物角膜表面一段时间,从而损坏内皮。此方法简单易行。该模型技术使用直径为8 mm的冷冻铜探针和温度监控设备来统一冷冻温度,并选择适当的冷冻时间以动态观察内皮损伤的愈合过程。这简化了您的研究。使用促进角膜内皮愈合的药物。具有良好再现性的内皮损伤的动物模型。

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