动物造模,脱细胞异体气管移植 中国实验动物信息网 2021-05-28 1204

　　方法：使用去污酶方法（包括脱氧胆酸钠/脱氧核糖核酸洗脱液），从成年新西兰白兔中取出半同种异体移植，并按要求进行多次洗脱（第1组，n = 7）。另一组作为对照保存在4°C的磷酸盐缓冲盐水中（第2组，n = 7）。将一组和两组气管移植到14只年龄匹配的兔子中。 结果：在第1组（脱细胞）中，所有兔子存活，而在第2组（对照组）中，所有兔子在手术后20和45天死于气道阻塞。从组织学上看，无细胞的同种异体移植物显示上皮和软骨完全再生，而新鲜移植物显示出炎症变化，没有上皮细胞和软骨。结论：无免疫的无细胞气管移植后，上皮和软骨环完全再生。结果表明，脱细胞过程降低了异体气管反应。因此，我们认为无细胞异体气管移植是替代气管的好方法。据我们所知，这是观察移植气管的*个长期（1年）预后实验。

　　关键字：细胞异体兔气管移植

　　简介：气管切除术的初步重建是治疗各种良性和恶性气管疾病的唯一有效方法。不幸的是，患儿气管的可切除长度通常限制为儿童总长度的30％，成人约6厘米。切除的进一步增加取决于安全气管替代方法的发展。提供安全和可复制的自体或人工气管移植的几乎所有尝试都令人失望，并质疑长期气管置换的未来，因此到目前为止，尚无临床可用的移植物。组织生物工程已成为创建接近正常气管的*有前途的技术。为了确定脱细胞的气管是否是替代过程的可行替代方法，我们在无免疫抑制的兔移植模型中评估了脱细胞的气管移植的存活率和组织学变化。材料和方法：同种异体移植物取自新西兰的一只成年雄兔，体重为3170-4575 g。通过静脉注射戊巴比妥（30 mg/kg）麻醉动物。仰卧位自然通风，无需气管插管即可进行收获或移植。宫颈气管通过正中颈切口暴露，然后从环状软骨中取出至鼻腔。从跳动的心脏供体中收集移植物，而没有温暖的局部缺血，从而获得*大的移植物存活率。收获的作品分为两组。将一半（对照）置于含有1％抗生素和抗真菌溶液的磷酸盐缓冲盐水（PBS）制成的原液中。用同样的方法将另一半存放24小时，并按以下步骤操作。剥离收集的气管覆盖组织，剥离气管肌肉，并用含有1％抗生素和抗真菌剂的PBS溶液冲洗4次（每次4小时）。将组织置于多个处理周期中，包括以下步骤：将组织在4°C下的AQA中储存48小时，然后与4％的脱氧胆酸钠一起孵育4小时。在含有2000 kUDnase-I的NaCl中孵育4小时。组织学证实存在细胞因子和主要组织相容性复合物（MHC）细胞。生物工程过程持续35天，相当于17个洗涤剂-酶（DEM）周期。然后，生物工程气管基质显示出更少的软骨细胞和更少的残留核，但完全消除了MHCI和II抗原。相反，MHCI和II在控制气管中很常见。移植年龄与接受者年龄相匹配的兔子。在麻醉下，将接受者置于仰卧位置，并通过正中颈切口切除6环气管段。在麻醉下，将接受者置于仰卧位置，并通过正中颈切口切除6环气管段。同种异体移植（对照组，n = 7；脱细胞，n = 7）使用吸收性线以端对端，连续的方式进行。伤口以通常的方式闭合。观察所有14只兔子3小时，然后将它们放回笼子。接受标准饲料和水。手术后的*天，每天两次镇痛（丁丙诺啡，0.05 mg/kg）。手术后连续5天以10 mg/kg的剂量服用恩诺沙星。没有免疫抑制剂或类固醇。术后五天，十五天和三个月，进行了软支气管镜检查。从第20天到第365天，对移植物进行病理检查。

　　结果：总结14个移植受者的结果。在脱细胞组（第1组）中，兔子在实验中幸存下来，随后被处死以进行组织学检查。在对照组（第2组）中，有7只兔子在手术后20、25、29、34、39、41、45天死于气道阻塞。支气管镜检查显示出移植后壁内和周围上皮再生的迹象，气道开放，第1组未显示狭窄或软化。然而，在第二组中，气道几乎完全被纤维化和肉芽组织阻塞。在组织学上，两组观察到明显的淋巴细胞和单核细胞浸润，严重的纤维化和软骨环破坏。在*组中，观察到完全上皮再生（分化良好的呼吸道上皮）和软骨气管环再生。*组未观察到淋巴细胞和单核细胞浸润。

　　讨论：与在无菌间质环境（肝脏，肾脏，心脏等）中发生的其他成功器官替代相比，气道代表了哺乳动物与外部环境之间的界面。粘膜在气道移植中起免疫活性细胞的作用。这些会导致急性移植排斥反应，并需要大剂量的免疫抑制。已经测试了各种假体，但是由于上皮缺乏，细菌感染，由于阻塞引起的过多肉芽形成和吻合口漏，尚未开发出临床上合适的假体。各种自体组织（例如心包，骨膜，食道和小肠）的重建都可以通过支架进行加固。抗原性研究表明，人气道上皮可以形成HLA-DR抗原，激活T淋巴细胞，并在移植排斥中起重要作用。使用免疫抑制剂控制免疫反应可可靠地抑制移植排斥，但在气管置换后也会增加呼吸道感染。因此，降低同种异体移植物本身的抗原性是一个很好的控制方法。为此已经报道了冷冻保存，放射疗法和光动力疗法。目前的结果表明，DEM过程需要活组织中MHC抗原的气管基质，同时保持类似于天然气管道的结构完整性，*重要的是，对于潜在的临床应用而言，这是一种简单有效的方法足够的长度。 ..在实验中，无细胞气管移植后观察到上皮和软骨的完全再生。在上皮层或上皮层下没有淋巴细胞浸润。支气管镜检查期间，气管腔打开，在移植区域未见软组织变化。实验结果表明，无细胞气管移植具有良好的长期组织活力和降低的抗原性。

　　结论：无免疫的无细胞气管移植后，上皮和软骨环完全再生。脱细胞过程减少了对气管的同种异体反应。