动物造模,CRISPR-Cas9 中国实验动物信息网 2022-12-15 1644

　　目的： 利用CRISPR/Cas9系统，敲除小鼠黑色素瘤细胞系的MATP基因，为MATP基因的功能研究奠定基础。

　　方法： 利用网站，设计针对MATP的特异性引物，并将引物链接到pCAS9/gRNA1载体。将阳性载体转染小鼠黑色素瘤细胞系B16F10，利用无限稀释的方法获得转染后的单克隆细胞株。提取不同细胞株的基因组，通过测序的方法进一步筛选出发生MATP基因切割的细胞株，并利用Western-blot的方法验证MATP的表达情况。

　　结果： 成功获得了3株MATP基因敲除的细胞株，Western-blot结果表明，该细胞株不表达MATP蛋白。

　　结论： 利用pCAS9/gRNA1载体，可以实现B16F10细胞系MATP基因的敲除。