目的:建立大鼠椎间盘髓核细胞体外凋亡模型。
方法:为了完全模拟退行性椎间盘营养缺乏症的微环境,本实验使用了含有1%,3%,5%,8%和10%小牛胎儿血清的DMEM培养基。用于培养和筛选椎间盘髓核细胞。*佳促凋亡浓度用于检测髓核细胞凋亡率,凋亡相关蛋白Bax,bcl-2和caspase-3的表达,细胞增殖曲线以及免疫荧光分析。
结果:流式细胞术测量的髓核细胞凋亡率随牛胎血清(FBS)浓度的降低而增加,而3%FBS是诱导凋亡的*有效浓度。 Westernblot显示Bax和caspase-3酶的表达。在3%FBS组中,bcl-2表达明显高于10%FBS组,bcl-2表达降低; CCK-8测试结果显示,在含3%FBS的培养基中细胞凋亡率增加。
结果表明,髓核细胞的增殖速率增加。 3%FBS组中FAS的表达明显高于10%FBS组。结论:3%的FBS诱导髓核细胞凋亡,*终可能导致细胞功能丧失。