动物造模,视网膜脱离动物模型 中国实验动物信息网 2022-01-05 1086

　　（1）复制方法（1）兔皮肤成纤维细胞培养：取一只体重约2公斤的新西兰兔，刮除其中一只臀部，并用75％的乙醇消毒皮肤。使用眼睛的角膜环膜素做一个8毫米直径的切口。分离并用剪刀除去纽扣形的皮肤组织，用无菌盐水冲洗几次，在一个小烧杯中切成1 mm 3、然后分散在6孔35 mm的塑料培养板上。加入适量的培养基（RPMI1640）。将含有15％小牛血清和青霉素（每种100 U/ml）的培养物在37°C和5％CO2下培养。每周更换两次介质。通常，从第7天到第10天，可以将成纤维细胞附着在培养板的底部并进行继代培养。在0.25％的胰蛋白酶消化，移液，用D-Hanks溶液分散并离心（1000/min，离心5分钟）后，将细胞在200 ml玻璃培养瓶中培养。

　　（2）玻璃体内注射的细胞悬液的制备：消化，分散并离心培养的细胞至瓶壁后，加入D-Hanks溶液和移液管匀浆细胞悬液。以约9：1的比例混合少量的具有锥虫蓝染色的悬浮液，使用血细胞计数器计数活细胞，*后将细胞悬浮液添加至每毫升2.5 x 1,000,000个细胞的浓度。使用结核菌素注射器吸出0.1 ml（含有2.5 x 100,000个细胞）以备后用。

　　（3）玻璃体内注射：注射前，用1％阿托品滴眼液扩张兔眼2-3次，并肌肉注射氯胺酮（5mg/kg体重）进行全身麻醉。在注射过程中，将1％甲基纤维素滴到角膜表面，并放置隐形眼镜。在外科显微镜下，将针头插入角膜瓣环后3 mm，当它从瞳孔区域到达玻璃体中心时，向上斜切针头尖端并缓慢注入细胞悬液。

　　（4）模型特征将细胞注入玻璃体后，立即使用检眼镜检查。您会看到注射路径中*稠密的玻璃体具有多尘浊度。在第4天，玻璃体上形成少量的串状或膜状生长。在第7天，增殖扩展到眼睛的后极，并连接到视盘或髓样复合体的两侧。它表现为视网膜血管的扩张和缠绕或皱纹。视网膜脱离通常在双侧髓质综片的局部脱离后约14天发生，有些逐渐扩展以完全脱离。通常，没有视网膜孔形成。

　　（5）比较医学该模型方法将同种异体皮肤成纤维细胞注射到兔眼玻璃体中。随着细胞不断增殖，形成增殖并拉动和分离视网膜。这个过程非常类似于人眼中增殖性玻璃体视网膜病变的临床特征。牵引性视网膜脱离的发生率直接反映了增生性玻璃体视网膜病变的严重程度，也可以用作测量该疾病药物疗效的间接定量指标。因此，该模型方法为研究药物对增生性玻璃体视网膜病变的预防和治疗作用提供了理想的动物模型。但是，创建模型时需要控制实验条件。兔眼球比人眼球小，并且晶状体的前后直径较大，因此玻璃体腔相对较小。在进行玻璃体注射时，必须掌握针头方向针以防止损坏镜片。外伤性白内障会影响眼底检查。针尖到达玻璃体后，必须注意不要损坏视网膜。这使得使用手术显微镜更安全地操作模型。